¿Qué es HPLC?
La cromatografía líquida de alta eficacia o
high performance liquid chromatography (HPLC) es una técnica de separación
analítica que se encuentra basada en la distribución de los componentes de una
mezcla entre dos fases (estacionaria y móvil)
inmiscibles mediante la afinidad que presenta el compuesto o analito por
dichas fases.
¿Cómo surgió y logró esta técnica a presentar una
gran eficacia?
La disminución del tamaño de las partículas
de la fase estacionaria hasta el tamaño de los micrones creó la necesidad de
utilizar altas presiones para que se logre que fluya la fase móvil, de esta
manera surgió la cromatografía de alta eficacia, la cual hace que sea distinta
a las demás técnicas debido a que se debe de trabajar a altas presiones y por
tal motivo presenta una gran eficacia en la hora de realizar separaciones.
¿En qué área nos
puede servir?
Como se trata de un tipo de cromatografía en
columna, este método es utilizado frecuentemente en bioquímica y química
analítica.
Toda técnica cromatográfica posee:
1.
Una fase estacionaria.
2.
Una fase móvil.
3.
La nuestra.
¿En qué consiste?
Consiste en una
fase estacionaria no polar (columna) y una fase móvil.
·
La fase estacionaria es sílica.
·
La fase móvil actúa de portador
de la muestra.
La muestra en solución es inyectada en la fase
móvil. Los componentes de la solución emigran de acuerdo a las interacciones
no-covalentes de los compuestos con la columna.
Dicho
brevemente, la separación cromatográfica de líquidos HPLC es el resultado de las
interacciones específicas entre las moléculas de la muestra en ambas fases,
móvil y estacionaria.
Aplicaciones
Método para la separación de compuestos dependiendo del área en que se
desee obtener, a continuación se exponen algunos ejemplos:
En bioquímica:
·
Aminoácidos y macromoléculas (proteínas, ácidos nucleicos y
carbohidratos).
En química y farmacia:
·
Fármacos, esteroides y antibióticos.
En toxicología:
·
Plaguicidas.
En química orgánica:
·
Compuestos semivolátiles, hidrocarburos y especies organometálicas.
En química inorgánica:
·
Una variedad de sustancias inorgánicas.
Tipos de muestras
·
Aguas.
·
Suelos.
·
Alimentos.
·
Extractos
·
Otros.
Tipos
de cromatografía en HPLC
Se clasifican de
acuerdo con el mecanismo de separación:
·
De adsorción Superficial: la fase estacionaria
es sólida. Para obtener la separación debemos tener diferencias de solubilidad
y retención por absorción en la fase
estacionaria. Las fases estacionarias más comunes son la de sílice y alúmina.
·
De partición: en donde las fases móvil (líquida) y estacionaria no pueden mezclarse. La separación se basa en
la distribución de solutos.
·
De intercambio Iónico: las fases
(estacionaria y móvil) son de la misma naturaleza (iónica), en donde los iones
de la fase estacionaria deben de tener cargas opuestas al eluyente.
·
De Exclusión por tamaño o de permeabilidad: la separación se basa en el tamaño molecular. Como fase
estacionaria se utilizan sustancias porosas de tamaño apropiado.
Parámetros a seguir
·
Naturaleza de la fase estacionaria
·
Interacción de la fase móvil y estacionaria
·
Tamaño de la partícula
·
Composición y flujo
·
Detector
Características de una fase móvil (solvente)
- Baja viscosidad para reducir las caídas de
presión
- Miscible con otros solventes para formar
mezclas útiles
- Compatible con el detector utilizado
- No debe disolver la fase estacionaria
- Bajo contenido de impurezas
HPLC: Las bombas que se usan
en HPLC se pueden clasificar según su funcionamiento y diseño en:
Datos interesantes del Paraguay
La industria farmacéutica
paraguaya cuenta con equipamientos para el control de calidad de sus productos,
incluyendo cromatógrafos de HPLC de cuarta generación, equipos pata test de
disolución y otros de alta complejidad. Así también cuenta con laboratorios
públicos y privados encargados del control de calidad con semejantes niveles de
equipamiento y capacitación a las que las empresas nacionales que acuden para
realizar sus análisis cuando no cuentan con instrumentos propios.
Entre ellos se encuentran:
Entre ellos se encuentran:
El Instituto Nacional de Tecnología, Normalización y Metrología (INTN).
· El Centro Multidisciplinario de Investigación Tecnológica (CEMIT),
dependiente del rectorado de la Universidad Nacional de Asunción.
· El laboratorio de Control de Drogas y Medicamentos (LABCON), dependiente
de la facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Nacional de Asunción
(realiza análisis fisicoquímicos de los medicamentos).
· PHARMACONTROL, laboratorio privado.
La Universidad Católica Nuestra Señora de la Asunción campus Alto Paraná cuenta con un HPLC en el laboratorio interno, ofreciendo un aprendizaje de calidad a sus alumnos en el área de las ciencias químicas.
La Universidad Católica Nuestra Señora de la Asunción campus Alto Paraná cuenta con un HPLC en el laboratorio interno, ofreciendo un aprendizaje de calidad a sus alumnos en el área de las ciencias químicas.
Bibliografía
D. A. Skoog, F. J. Holler, T. A. Nieman. Principios de Análisis Instrumental . McGraw-Hill. 5ta Edición
