CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN (HPLC).

¿Qué es HPLC?

      La cromatografía líquida de alta eficacia o high performance liquid chromatography (HPLC) es una técnica de separación analítica que se encuentra basada en la distribución de los componentes de una mezcla entre dos fases (estacionaria y móvil)  inmiscibles mediante la afinidad que presenta el compuesto o analito por dichas fases.

¿Cómo  surgió y logró esta técnica a presentar una gran eficacia?

      La disminución del tamaño de las partículas de la fase estacionaria hasta el tamaño de los micrones creó la necesidad de utilizar altas presiones para que se logre que fluya la fase móvil, de esta manera surgió la cromatografía de alta eficacia, la cual hace que sea distinta a las demás técnicas debido a que se debe de trabajar a altas presiones y por tal motivo presenta una gran eficacia en la hora de realizar separaciones.

¿En qué área nos puede servir?

      Como se trata de un tipo de cromatografía en columna, este método es utilizado frecuentemente en bioquímica y química analítica.

Toda técnica cromatográfica posee:

1.       Una fase estacionaria.

2.       Una fase móvil.

3.       La nuestra.

¿En qué consiste?

      Consiste en una fase estacionaria no polar (columna) y una fase móvil.

·         La fase estacionaria es sílica.

·         La fase móvil actúa de portador de la muestra.

La muestra en solución es inyectada en la fase móvil. Los componentes de la solución emigran de acuerdo a las interacciones no-covalentes de los compuestos con la columna.

      Dicho brevemente, la separación cromatográfica de líquidos HPLC es el resultado de las interacciones específicas entre las moléculas de la muestra en ambas fases, móvil y estacionaria.

Aplicaciones

      Método para la separación  de compuestos dependiendo del área en que se desee obtener, a continuación se exponen algunos ejemplos:

En bioquímica:

·         Aminoácidos y macromoléculas (proteínas, ácidos nucleicos y carbohidratos).

En química y farmacia:

·         Fármacos, esteroides y antibióticos.

En toxicología:

·         Plaguicidas.

En química orgánica:

·         Compuestos semivolátiles, hidrocarburos y  especies organometálicas.

En química inorgánica:

·         Una variedad de sustancias inorgánicas.

Tipos de muestras

·         Aguas.

·          Suelos.

·         Alimentos.

·         Extractos

·         Otros. 

Tipos de cromatografía en HPLC

Se clasifican de acuerdo con el mecanismo de separación:

·         De adsorción Superficial: la fase estacionaria es sólida. Para obtener la separación debemos tener diferencias de solubilidad y retención por absorción  en la fase estacionaria. Las fases estacionarias más comunes son la de sílice y alúmina.

·         De partición: en donde  las fases móvil (líquida) y estacionaria  no pueden mezclarse. La separación se basa en la distribución de solutos.

·         De intercambio Iónico: las fases (estacionaria y móvil) son de la misma naturaleza (iónica), en donde los iones de la fase estacionaria deben de tener cargas opuestas al  eluyente.

·         De Exclusión por tamaño o de permeabilidad: la separación se basa en el tamaño molecular. Como fase estacionaria se utilizan sustancias porosas de tamaño apropiado.

Parámetros a seguir

·         Naturaleza de la fase estacionaria

·         Interacción de la fase móvil y estacionaria

·         Tamaño de la partícula

·         Composición y flujo

·         Detector

Características de una fase móvil (solvente)

• Baja viscosidad para reducir las caídas de presión
• Miscible con otros solventes para formar mezclas útiles
• Compatible con el detector utilizado
• No debe disolver la fase estacionaria
• Bajo contenido de impurezas

HPLC: Las bombas que se usan en HPLC se pueden clasificar según su funcionamiento y diseño en:

Datos interesantes del Paraguay

   La industria farmacéutica paraguaya cuenta con equipamientos para el control de calidad de sus productos, incluyendo cromatógrafos de HPLC de cuarta generación, equipos pata test de disolución y otros de alta complejidad. Así también cuenta con laboratorios públicos y privados encargados del control de calidad con semejantes niveles de equipamiento y capacitación a las que las empresas nacionales que acuden para realizar sus análisis cuando no cuentan con instrumentos propios. 

Entre ellos se encuentran:

    El Instituto Nacional de Tecnología, Normalización y Metrología (INTN).

·      El Centro Multidisciplinario de Investigación Tecnológica (CEMIT), dependiente del rectorado de la Universidad Nacional de Asunción.

· El laboratorio de Control de Drogas y Medicamentos (LABCON), dependiente de la facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Nacional de Asunción (realiza análisis fisicoquímicos de los medicamentos).

·    PHARMACONTROL, laboratorio privado.

          La Universidad Católica Nuestra Señora de la Asunción campus Alto Paraná cuenta con un HPLC en el laboratorio interno, ofreciendo un aprendizaje de calidad a sus alumnos en el área de las ciencias químicas.

Bibliografía

       D. A. Skoog, F. J. Holler, T. A. Nieman. Principios de Análisis Instrumental . McGraw-Hill. 5ta Edición